qPCR试剂盒

Biomarker 2X SYBR Green Fast qPCR Mix

目录: RK02001

规格: 500 RXN

浓度: 2X

Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix是采用SYBR^® Green I 嵌合荧光法进行qPCR反应的专用试剂，通过对SYBR^® / FAM通道进行荧光信号定量检测，可以获得PCR过程中DNA扩增的真实数据，采用抗体法热启动Taq酶进行扩增，在保证扩增效果的同时极大地提高了产品的特异性。

本产品为2×浓度预混液，除引物和模板外，包含了所有qPCR所需成分，为实验操作提供了极大的便利。

运输方式：干冰运输。

保存方式：-20 °C避光保存。产品有效期2年。

1.兼容性完美，全平台通用：提供ROX预混版本，适用于所有主流定量PCR仪器。

2.灵敏度高：采用独特优化的反应Buffer，可检测低至10 pg的模板。

图1：将质粒进行8 个10倍梯度稀释，以5×10⁷ -10⁰ 拷贝/µl的质粒为模板，进行扩增。发现Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix扩增效率高，且可获得良好的线性关系。

3.扩增性能优越：短时间内可反复冻融10次以上，扩增效率依然很高。

图2：以1 μg不同物种的RNA为模板（蓝色：人肝癌细胞；青色：鸡；红色：斑马鱼；黑色：水稻种子），用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit进行逆转录，得到cDNA产物。再以100 ng不同物种的 cDNA为模板，用反复冻融10次以上的Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix进行qPCR扩增。结果所示：溶解曲线呈现特征单峰。

4.特异性强，适应不同样本：通过抗体封闭聚合酶活性，有极强的特异性。

图3：以1 μg不同物种的RNA为模板（红色：人肝癌细胞；蓝色：鸡；黑色：斑马鱼；紫色：水稻种子；黄色：番茄果），用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand  cDNA Synthesis Kit进行逆转录，得到cDNA产物。再以100 ng不同物种的 cDNA为模板，用Biomarker 2×SYBR Green Fast qPCR Mix进行qPCR扩增。结果所示：试剂盒可完美识别目标基因扩增，特异性极高。

5.重复性好 ：设置20个复孔，S型扩增曲线几乎重合。

图4：以1μg水稻种子的RNA为模板，用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit进行逆转录，得到cDNA产物。再以100 ng的 cDNA为模板，设置20个复孔，用Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix进行qPCR扩增。

转录组项目文章发表，大部分的验证都采用了qPCR方案，统计部分百迈客成功案例：人、鼠、家禽、水产、昆虫、经济作物、林木、花卉果蔬等。

Q1：Ct值偏大（如Ct值＞30）

1）模板量太低或基因表达丰度低，可适当增加模板量。

2）反应体系中存在杂质抑制了酶的活性，可进行梯度稀释降低模板量，或者检查模板的纯度，确保模板纯度高。

3）若是扩增目的产物过长，建议优化引物，或者采用三步法程序扩增，同时
建议扩增产物长度不超过300 bp。

4）引物设计不当导致扩增效率低，建议优化引物，通过标准曲线确认扩增效率。

Q2：复孔重复性差

1）误差导致，建议加样过程中，使用精密的移液器，且可增大反应体系。

2）仪器长时间未校准，建议实验开始前，将仪器定期校准。

Q3：扩增曲线未达到平台期

1）模板量太低或基因表达丰度低，可适当增加模板量。

2）循环数太少，可适当增加循环数。

Q4：无S型扩增曲线

1）模板量太低、或基因表达丰度低，可适当增加模板量。

2）样本不纯，杂质抑制qpcr扩增反应。可以重新提取样本，或制作标准曲线确认样本质量。

3）非特异性引物导致，建议优化引物，液可以用内参基因做对照确认引物的问题。必要时换新的引物。