BSA关联定位分析

快速,准确,高性价比

高效快速基因定位策略

BSA分析是将分离群体中表现出极端性状的个体混合起来构建两个混池,通过分析两个混池间差异序列,快速定位与目的基因紧密连锁分子标记的分析方法,该方法广泛应用于动植物基因定位中。

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个性化分析方案

BSA分析以其快速、准确、性价比高的分析特点在许多物种的几十个性状上得到广泛应用

针对特定的群体和性状,我们将会推荐合理的分析方案

  • 物种取样

  • 建库测序

  • 标记开发

  • 关联分析

分析内容

根据物种基因组大小、复杂度和研究目的,可以选择不同的分析策略,包括重测序-BSA及其突变体分析形式Mutmap。

测序数据质控;与参考基因组比对;SNP、InDel检测和注释;关联分析;关联区域注释

技术优势

百迈客成功完成了近1000个物种的10000多个性状的定位工作

项目经验及其丰富,目前已发表文章80+,累计影响影子300+

可根据项目需要选择最佳分析方案,保障结果精准

选材要求及测序方案

取样要求 测序方案 项目周期
重测序-BSA需要有参考基因组的物种 Illumina测序平台,PE150测序策略,保证Q30达到80% 45天
具有重要农艺性状个体构建的遗传群体(F2、RIL、DH、BC等)) 推荐混池中每个子代测序深度≥1×,每个亲本≥20×
子代混池规模:质量性状不低于30+30,数量性状推荐选取群体规模的5%-10%,同时不低于30+30的个体数

测序数据统计与评估

高质量的测序数据是进行后续分析的重要基础,在获得测序的Raw data后,我们将会进行测序数据产出统计、碱基测序质量分布、碱基类型分布等多种测序评估方式,保证测序数据的准确性。

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遗传变异检测

SNP(Single Nucleotide Polymorphism)及InDel(Insertion-Deletion)是基因组上最为常见的遗传标记,具有数量多、多态性丰富的特点,SNP和InDel的检测主要通过GATK和samtools软件工具包实现,变异位点注释使用SnpEff软件。

关联分析

根据亲本和混池的SNP及Indel标记,利用SNP-Index和ED分析方法同时进行标记与性状的关联分析,获得与目标性状相关的基因。

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关联区域注释

应用BLAST软件对候选区间内的编码基因进行多个数据库(NR、Swiss-Prot、GO、KEGG、COG)的深度注释,通过详细的注释,进一步缩小关联区域,快速筛选候选基因。

成功案例

混池规模多少合适?

对于数量性状定位的混池,通常建议混池规模为群体大小的5%-10%。不同的测序策略,混池规模会有略微的差别,重测序BSA及转录组BSA最低要求30个以上,SLAF-BSA最低要求50个以上。文献报道(300样/池&160样/池相比)混池规模越大,定位的效果会越好。

混池的测序深度推荐?

常测序数据量越大,标记的准确性会越高,但成本也会越高,综合考虑,在这里我们给大家提供BSA项目的最低数据量。对于SLAF-BSA,通常我们建议子代混池至少达到每个个体1×的数据量,比如混池规模为30+30,那么每个混池测至少30×;对于重测序BSA,混池规模在50以下,子代1×的数据是可以的,但是像基因组比较大的物种(如玉米),若混池规模为100+100这样的情况,每个混池测50×也是没有问题的。

BSA能不能做由Indel、结构变异(转座子滑变)、导入系片段所引起的性状差异的定位?

能做。现在我们的BSA关联分析是基于SNP,因为SNP在基因组上的密度要远远高于Indel以及结构变异,这会使我们定位更加精细。如果某一个性状是由Indel、结构变异、导入系所引起的,那么它通常是与某些SNP连锁发生的,通过SNP我们会找到候选区域,再在候选区域内寻找这些Indel或结构变异或导入系,来寻求决定该性状的Indel或结构变异或导入系。

BSA没有亲本可不可以做?

可以,对于没有亲本的混池,我们会采取ED的方法进行关联分析。

有亲本和没有亲本,对定位效果有影响吗?

有影响。从关联分析的方法上,有亲本的BSA我们会有两种关联分析方法,SNP-Index和ED,最后的定位结果是两种方法的交集,无亲本的只能用ED的方法进行关联分析。有亲本的作用是排除亲本非多态性标记对定位的影响,举例说明一下,有一个标记在混池间是有多态性的,但在亲本上是没有多态性,如果有亲本,我们的定位结果是不会有这样的标记,但是没有亲本,定位结果中就会有这样的标记,定位的区域会变大,假阳性较多。

老师群体有两个,但每个个体都不多,能不能把两个群体混合做?

不可以,两个不同群体所采用的阈值没法计算。

SLAF-BSA定位区域,想在精细一点怎么做?

推荐至少做两个亲本的重测序,这样我们会提供定位区域内非同义突变基因的信息,进一步缩小候选区域的范围,相当于在SLAF-BSA的基础上精细点,如果老师经费允许的话,群体也做重测序效果肯定是更好的,群体的SNP信息要远高于SLAF的,定位也会相应变精细点。

无参做SLAF-BSA和BSR区别?

没有参考基因组的话,通过SLAF我们只能关联到一些标签,对于老师后期的数据利用并不是特比好,而通过转录组可以进行Uningene的组装,进而通过关联分析获得候选区域内的Uningene信息并进行功能注释,对于老师后期数据利用还是比较好的。

Mutmap定位的适用条件?

化学诱变或者是物理诱变引起的点突变;野生型亲本重测序+突变型子代混池测序;有参考基因组;任何发生性状分离的家系群体。