Biomarker HS 2X HF Master Mix
目录: RK02006
规格: 50 RXN
浓度: 2X
该试剂盒包含 HiFi DNA聚合酶、dNTPs、反应缓冲Buffer、优化的MgCl2溶液,该预混液中仅需加入DNA模板、引物和水即可进行扩增。该预混液主要针对多样性模板,对如动物、植物、cDNA等均有较好的扩增效率。
运输方式:干冰运输。
保存方式:-20 °C避光保存。
Biomarker HS DNA聚合酶是一种全新的类似Pyrococcus furiosus来源的突变酶,具有独特的结构,融合了持续合成增强结构域,提高了保真度和延伸速度。保真度比Pyrococcus furiosus DNA聚合酶高6倍。
优化的缓冲体系,适用于人、鸡、昆虫、质粒、玉米、水稻、番茄、拟南芥等样本。
图1:使用Biomarker HS DNA聚合酶,分别以人、鸡、小鼠、昆虫、质粒、玉米、水稻、番茄的全基因组DNA为模板,扩增长度分别为628 bp、 2.5 kb、1750 bp、750 bp、549 bp、300 bp、1.5 kb、1.2 kb的目标片段。所有片段均可以实现高特异性、高产量扩增。M:250 bp DNA Marker。
图2:使用Biomarker HS DNA聚合酶,对不同GC含量(35%~65%)片段都可实现高质量的扩增。M:250 bp DNA Marker。
图3:使用Biomarker HS DNA聚合酶,以不同模板量(10 pg、100 pg、1 ng、10 ng、500 ng)人基因组DNA为模板,扩增 628 bp的目的片段,发现不同模板量都可有效扩增。M:250 bp DNA Marker。
Biomarker HS DNA聚合酶添加了能够抑制酶活性的单克隆抗体,可进行高特异性的热启动PCR。
图4:使用Biomarker HS DNA聚合酶,以不同基因组DNA为模板,扩增长度分别为549 bp、628 bp、1750 bp、2.5 kb、 5 kb、10 kb、13 kb的目的片段。所有片段均可以实现高特异性、高产量扩增。M:λ-Hind Ⅲ DNA Marker。
1.常规PCR(包含动物,植物等多种模板)
2.菌落PCR(直接菌落PCR,没有任何抑制作用)
3.长片段扩增(人基因组最长可达到23kb)
4.16S rDNA鉴定
5.cDNA(条带单一,50 ng Total RNA投入量获得的cDNA即可作为模板)
Q1:逆转录后的产物cDNA作为模板,每次加多少体积?
A1:如果DNA模板是从cDNA合成反应中获得的,则添加的体积应小于总反应体积的10%。若扩增长片段,可适当增加模板投入量。
Q2:扩增完的产物是平末端还是黏性末端?
A2:高保真酶扩增完的都是平末端产物。
Q3:出现非特异性扩增,要如何改善?
A3:1) 引物:引物自身形成二聚体,或者引物与靶序列有非特异性互补。建议重新优化设计引物;
2) 模板:模板量过高或者降解,使用量建议参考说明书。以及模板被污染,建议凝胶电泳检测模板纯度以及完整性。
3) 反应程序不够优化:若杂带比目的条带小,可提高退火温度,降低循环数;若杂带比目的条带大,可缩短延伸时间、降低循环数。