无缝克隆试剂盒

Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix

产品名称

Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix

目录: RK02003

规格: 50 RXN

产品信息

产品介绍

Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix是一种简单、快速高效的DNA无缝克隆技术,可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化;在插入片段正/反向PCR引物5΄端引入线性化载体的末端序列;PCR产物5΄和3΄最末端分别带有和线性化载体两末端一致的同源序列(Overlaps,15~25 bp);这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在特定酶混合物的催化下,50 ℃反应15~60 min即可进行转化,完成定向克隆。

运输与保存方式

运输方式:干冰运输。

保存方式:-80~-20 ℃避光保存。

产品特点

  • 位点选择灵活:载体任意位置基因克隆;
  • 快速简便:省略酶切、切胶回收、酶连等过程,大约1h完成载体构建;
  • √确:不需要增加任何额外的程序;
  • 克隆效率高:阳性克隆高达90%以上;
  • 一次进行多片段目的基因的重组。

图1:Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix试剂盒,无缝克隆实验原理。

产品应用

  • 快速克隆
  • 高通量克隆
  • 无缝克隆
  • DNA定点突变

分子试剂+测序应用场景

产品组分

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FAQ

Q1:引物如何设计?

A1: 1)载体的线性化方式有三种:双酶切、单酶切、反向PCR,优先选择反向PCR。

2)引物三部分:同源臂(15~25 bp,GC含量40~60%)+酶切位点(根据实验需求保留或者删除)+特异性引物(引物Tm值的计算不包括同源臂的序列)。

Q2:能够组装≤200 bp的dsDNA片段吗?

A2:可以。当片段大小≤200 bp时,为了更佳的效果,推荐插入片段使用量为载体的五倍以上。

Q3:可以使用更长或更短的反应时间吗?

A3:可以。当组装2~3个片段时,15 min的反应时间已经足够。当组装4~6个片段时,推荐60 min的反应时间。通常情况下反应时间不小于15 min。在某些情况下,更长的反应时间可能适当的提高组装效率,但是不能超过4 h。切勿使用MultiF Seamless Assembly反应过夜。