Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix
目录: RK02003
规格: 50 RXN
Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix是一种简单、快速高效的DNA无缝克隆技术,可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化;在插入片段正/反向PCR引物5΄端引入线性化载体的末端序列;PCR产物5΄和3΄最末端分别带有和线性化载体两末端一致的同源序列(Overlaps,15~25 bp);这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在特定酶混合物的催化下,50 ℃反应15~60 min即可进行转化,完成定向克隆。
运输方式:干冰运输。
保存方式:-80~-20 ℃避光保存。
Q1:引物如何设计?
A1: 1)载体的线性化方式有三种:双酶切、单酶切、反向PCR,优先选择反向PCR。
2)引物三部分:同源臂(15~25 bp,GC含量40~60%)+酶切位点(根据实验需求保留或者删除)+特异性引物(引物Tm值的计算不包括同源臂的序列)。
Q2:能够组装≤200 bp的dsDNA片段吗?
A2:可以。当片段大小≤200 bp时,为了更佳的效果,推荐插入片段使用量为载体的五倍以上。
Q3:可以使用更长或更短的反应时间吗?
A3:可以。当组装2~3个片段时,15 min的反应时间已经足够。当组装4~6个片段时,推荐60 min的反应时间。通常情况下反应时间不小于15 min。在某些情况下,更长的反应时间可能适当的提高组装效率,但是不能超过4 h。切勿使用MultiF Seamless Assembly反应过夜。