无缝克隆试剂盒

产品名称

Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix

目录: RK02003

规格: 50 RXN

Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix是一种简单、快速高效的DNA无缝克隆技术，可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化；在插入片段正/反向PCR引物5΄端引入线性化载体的末端序列；PCR产物5΄和3΄最末端分别带有和线性化载体两末端一致的同源序列(Overlaps，15~25 bp)；这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在特定酶混合物的催化下，50 ℃反应15~60 min即可进行转化，完成定向克隆。

运输方式：干冰运输。

保存方式：-80~-20 ℃避光保存。

• 位点选择灵活：载体任意位置基因克隆；
• 快速简便：省略酶切、切胶回收、酶连等过程，大约1h完成载体构建；
• 精确：不需要增加任何额外的程序；
• 克隆效率高：阳性克隆高达90%以上；
• 一次进行多片段目的基因的重组。

图1：Biomarker MultiF Seamless Assembly Mix试剂盒，无缝克隆实验原理。

• 快速克隆
• 高通量克隆
• 无缝克隆
• DNA定点突变

Q1：引物如何设计？

A1: 1）载体的线性化方式有三种：双酶切、单酶切、反向PCR，优先选择反向PCR。

2）引物三部分：同源臂(15~25 bp，GC含量40~60%)+酶切位点(根据实验需求保留或者删除)+特异性引物(引物Tm值的计算不包括同源臂的序列)。

Q2：能够组装≤200 bp的dsDNA片段吗？

A2:可以。当片段大小≤200 bp时，为了更佳的效果，推荐插入片段使用量为载体的五倍以上。

Q3：可以使用更长或更短的反应时间吗？

A3:可以。当组装2~3个片段时，15 min的反应时间已经足够。当组装4~6个片段时，推荐60 min的反应时间。通常情况下反应时间不小于15 min。在某些情况下，更长的反应时间可能适当的提高组装效率，但是不能超过4 h。切勿使用MultiF Seamless Assembly反应过夜。