外泌体(Exosome)是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,分布于外周血、 尿液、 唾液、腹水、羊水等体液中。其来源多样,可来自各种类型细胞,其内容物含蛋白、脂质和核酸等,特别是在其中发现的non-coding RNA (miRNAlncRNAcircRNA) 使其更具有意义。外周血等体液中的分子标志物的检测具有无创伤、可重复特点,同时可于同一时间点进行多项指标的检测。通过高通量技术对外泌体RNA进行测序,可快速高效获得外泌体RNA的全面信息,是疾病诊断和随访的理想手段。

分析内容

技术优势

1 利用高通量测序技术使癌症发生发展机理高效快速研究成为可能;

2 相较于传统方法稳定性高,信息量大;

3 外泌体来源易得,使得组织样本不可用或不愿或不能接受重复活检的患者的样本检测成为可能,对于后续临床应用意义重大;

4 不同水平的非编码RNA研究深度解析复杂调控网络;

5 其他

 

样品要求

1. 样品类型:Total RNA、细胞上清、血清、血浆、尿液等。

2. 样品总量:浓度500pg/ul ,总量≥3 ng(Total RNA);≥30mL(细胞上清);≥3mL(血液)。

样本准备与保存方法:以血浆样本为例

用于提取Total RNA的血浆样本,其RNA含量低且极易降解,如具备提取条件建议用新鲜液体样本直接提取,如不具备提取条件,参照以下方式处理:

A. 用STRECK无创管收集全血样本;

B. 轻轻颠倒混匀十次后,立即将全血置于 4°C 或冰盒中正立放置;

C. 离心分离得到上层血浆样本(血样需在 1h 内进行血浆分离,依据抗凝管操作说明或客户实验室血浆分离步骤进行操作);

D. 将血浆转移至 1.5ml 离心管(RNase free)中,13000 X g 离心 2min,弃去血细胞沉淀;

E. 将上浆转移至2.0ml 旋盖离心管(RNase free)中,每个管子吸入 1mL血浆进行分装;

F. 迅速置于液氮中冷冻 3~4 小时,然后转移至-80°C 或液氮中长期保存;

G. 运输方式:将样品管用封口膜封口,再放置于50mL离心管中或封口袋中,里面添加棉花等固定(切勿在 50 mL 管内或其他支撑物内加入液氮等危险品),干冰运输。

外泌体miR21使卵巢癌细胞产生紫杉醇抗药性

    晚期卵巢癌通常会扩散到大网膜的内脏脂肪组织。但是,调节卵巢癌生长的网膜基质细胞衍生的分子决定因素尚未表征。德克萨斯大学MD安德森癌症中心的研究人员使用高通量测序技术,鉴定出与卵巢癌细胞相比,癌症相关的脂肪细胞(CAAs)和成纤维细胞(CAFs)来源的外泌体中含有高丰度的microRNA-21的isomiRNAs。功能研究表明,miR21从CAAs或CAFs转移至癌细胞,抑制卵巢癌细胞凋亡并通过结合APAF1使得癌细胞耐药。这些数据表明,在网膜肿瘤微环境中相邻的基质细胞来源的外泌体传递miR21改变转移性卵巢癌细胞的恶性表型,而抑制基质来源的miR21的转移在治疗转移性和复发性卵巢癌方面具有很好应用前景。

外泌体将miR21从脂肪细胞和成纤维细胞转移至卵巢癌细胞

卵巢组织和癌细胞系中miR21的差异表达

参考文献:
Yeung C L A, Co N N, Tsuruga T, et al. Exosomal transfer of stroma-derived miR21 confers paclitaxel resistance in ovarian cancer cells through targeting APAF1[J]. Nature communications, 2016, 7.
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