Biomarker 2X SYBR Green Fast qPCR Mix
目录: RK02001
规格: 500 RXN
浓度: 2X
Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix是采用SYBR® Green I 嵌合荧光法进行qPCR反应的专用试剂,通过对SYBR® / FAM通道进行荧光信号定量检测,可以获得PCR过程中DNA扩增的真实数据,采用抗体法热启动Taq酶进行扩增,在保证扩增效果的同时极大地提高了产品的特异性。
本产品为2×浓度预混液,除引物和模板外,包含了所有qPCR所需成分,为实验操作提供了极大的便利。
运输方式:干冰运输。
保存方式:-20 °C避光保存。产品有效期2年。
1.兼容性完美,全平台通用:提供ROX预混版本,适用于所有主流定量PCR仪器。
2.灵敏度高:采用独特优化的反应Buffer,可检测低至10 pg的模板。
图1:将质粒进行8 个10倍梯度稀释,以5×107 -100 拷贝/µl的质粒为模板,进行扩增。发现Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix扩增效率高,且可获得良好的线性关系。
3.扩增性能优越:短时间内可反复冻融10次以上,扩增效率依然很高。
图2:以1 μg不同物种的RNA为模板(蓝色:人肝癌细胞;青色:鸡;红色:斑马鱼;黑色:水稻种子),用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit进行逆转录,得到cDNA产物。再以100 ng不同物种的 cDNA为模板,用反复冻融10次以上的Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix进行qPCR扩增。结果所示:溶解曲线呈现特征单峰。
4.特异性强,适应不同样本:通过抗体封闭聚合酶活性,有极强的特异性。
图3:以1 μg不同物种的RNA为模板(红色:人肝癌细胞;蓝色:鸡;黑色:斑马鱼;紫色:水稻种子;黄色:番茄果),用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit进行逆转录,得到cDNA产物。再以100 ng不同物种的 cDNA为模板,用Biomarker 2×SYBR Green Fast qPCR Mix进行qPCR扩增。结果所示:试剂盒可完美识别目标基因扩增,特异性极高。
5.重复性好 :设置20个复孔,S型扩增曲线几乎重合。
图4:以1μg水稻种子的RNA为模板,用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit进行逆转录,得到cDNA产物。再以100 ng的 cDNA为模板,设置20个复孔,用Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix进行qPCR扩增。
转录组项目文章发表,大部分的验证都采用了qPCR方案,统计部分百迈客成功案例:人、鼠、家禽、水产、昆虫、经济作物、林木、花卉果蔬等。
Q1:Ct值偏大(如Ct值>30)
1)模板量太低或基因表达丰度低,可适当增加模板量。
2)反应体系中存在杂质抑制了酶的活性,可进行梯度稀释降低模板量,或者检查模板的纯度,确保模板纯度高。
3)若是扩增目的产物过长,建议优化引物,或者采用三步法程序扩增,同时
建议扩增产物长度不超过300 bp。
4)引物设计不当导致扩增效率低,建议优化引物,通过标准曲线确认扩增效率。
Q2:复孔重复性差
1)误差导致,建议加样过程中,使用精密的移液器,且可增大反应体系。
2)仪器长时间未校准,建议实验开始前,将仪器定期校准。
Q3:扩增曲线未达到平台期
1)模板量太低或基因表达丰度低,可适当增加模板量。
2)循环数太少,可适当增加循环数。
Q4:无S型扩增曲线
1)模板量太低、或基因表达丰度低,可适当增加模板量。
2)样本不纯,杂质抑制qpcr扩增反应。可以重新提取样本,或制作标准曲线确认样本质量。
3)非特异性引物导致,建议优化引物,液可以用内参基因做对照确认引物的问题。必要时换新的引物。