微生物QPCR

快速、准确地测定目标微生物数量

微生物QPCR服务简介

实时荧光定量PCR技术（Real-time Quantitative PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。微生物QPCR物可以对细菌16S 、真菌ITS或特定菌（如乳酸菌、双歧杆菌等）进行绝对定量检测，能够快速、准确地测定目标微生物数量。

荧光定量PCR技术原理

荧光定量PCR（qPCR）是通过荧光染料或荧光标记的具有特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，可以实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物量进行分析，计算待测样品模板的初始  拷贝数，也被称为实时荧光定量PCR。

结果展示

1、目的基因的 qPCR 实验结果，16s 标准品的制备及样品的 qPCR 扩增。

目的基因的 qPCR 实验结果，16s 标准品的制备及样品的 qPCR 扩增（左：扩增曲线、右：熔解曲线）

2、标准品的标准曲线

标准品的标准曲线
基因标准曲线
基因标准曲线：拷贝数log值

3、目的基因的扩增曲线和溶解曲线

目的基因的扩增曲线
目的基因的扩增曲线
目的基因的溶解曲线
目的基因的溶解曲线

4、拷贝数换算

拷贝数换算
拷贝数换算

服务优势

项目经验丰富，水体、土壤、粪便等样本类型均可承接；

每个反应均为3个重复，结果稳定性好；

SYBR 荧光染料法和 Taqman 探针法两种方法均可提供。

微生物QPCR常见问题

相对定量内参选择标准是什么？

  1. 在不同处理中表达稳定性较高的基因；
  2. 中等或高表达基因。

真核生物常见内参：18S rRNA、β-actin、GAPDH、EF-1α等；原核生物：16S rRNA、gyrB等。如果无法确定内参，建议参考文献，或者做内参筛选实验。

如何选择适合的引物和探针？

引物和探针的选择需要考虑到目标微生物的特异性和保守性。可以使用公开可获得的微生物基因数据库，如NCBI，进行引物和探针设计。此外，确保引物和探针的互补性和避免引物之间的重叠和相互作用也很重要。

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